干貨丨合成著色劑分析之亮藍(lán)分析有雜峰干擾？安譜實(shí)驗(yàn)帶你揭秘真相！

     食用色素，是色素的一種，即能被人適量食用的可使食物在一定程度上改變原有顏色的食品添加劑，又稱食用染料和著色劑，分為天然和人工合成兩種，合成著色劑因色澤鮮艷，著色力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、價格低廉等特點(diǎn)而被廣泛使用。

     chang用的食品添加有新紅、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán) 、赤蘚紅等，《GB 5009.35-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定》中規(guī)定了這7種合成著色劑的液相分析方法，7種合成著色劑中其中一種著色劑是亮藍(lán)，關(guān)于亮藍(lán)的測定經(jīng)常聽實(shí)驗(yàn)員反饋亮藍(lán)旁邊總是有雜質(zhì)峰，事實(shí)真是這樣嗎？

我們一起來揭秘真相！

上機(jī)標(biāo)品

準(zhǔn)備亮藍(lán)標(biāo)品， 用水配置成10ppm。

儀器條件

色譜柱： C18-Wp（4.6mm*250mm，5um）

流動相：A:甲醇B：0.02M乙酸銨

梯度洗脫：0min 20%A，5min 35% A，12~18min 98%A，20~27min 20%A

柱溫：25℃

波長：254nm

進(jìn)樣量：20ul

流速：1.0ml/min

實(shí)驗(yàn)譜圖

圖1亮藍(lán)色譜圖（色譜條件1）

圖4 亮藍(lán)色譜圖（色譜條件2）

圖5 亮藍(lán)色譜圖（色譜條件3）

結(jié)果分析

扣除溶劑空白后得到的亮藍(lán)譜圖見圖1，果然不是對稱的色譜峰，而且非但不對稱，看著還像3個峰。那么到底是什么原因呢，我們從以下方面進(jìn)行了分析。

（1）標(biāo)準(zhǔn)品問題。若標(biāo)準(zhǔn)品純度不高，可能會帶來雜質(zhì)干擾，查看亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的證書標(biāo)識的純度是87.6%，純度不是特別高，但是是某進(jìn)口D公司生產(chǎn)的，無法確定3個峰里面是否含有雜質(zhì)峰。

（2）光譜特征。紫外-可見吸收光譜是化合物固有的性質(zhì)，一般不同的化合物其吸收特征是不一樣的，因此可以通過光譜特征對化合物進(jìn)行定性分析。那么這3個峰到低是什么物質(zhì)呢，使用DAD檢測器對其進(jìn)行200-800nm范圍內(nèi)的掃描，得到的光譜見圖2，由此可見3個化合物的紫外吸收特征非常相似，在HPLC-UV分析中這種情況一般都是同分異構(gòu)體。

圖2 亮藍(lán)光譜掃描圖

（3）結(jié)構(gòu)特征。那么亮藍(lán)真的有同分異構(gòu)體嗎，亮藍(lán)的結(jié)構(gòu)式見圖3，為非偶氮類酸性染料，主要有3個同分異構(gòu)體，自然界中常以 3 種同分異構(gòu)體的混合物(間位磺化物:對位磺化物:鄰位磺化物＝75～85: 15～20:0～8)形式存在，因而液相分析的時候常常得不到單一對稱的色譜峰。

圖3 亮藍(lán)結(jié)構(gòu)式

（4）定量分析。那么如何對亮藍(lán)的含量進(jìn)行定量分析是實(shí)驗(yàn)員比較關(guān)心的問題，液相色譜定量分析的前提是先分離，嘗試對流動相比例進(jìn)行調(diào)節(jié)，以減緩洗脫能力，我們發(fā)現(xiàn)這3個峰是可以實(shí)現(xiàn)基線分離的，比如圖4，圖5，不同色譜條件、不同濃度時各色譜峰面積結(jié)果以信息見表1。

表1 亮藍(lán)色譜峰面積

由此可以看出，不同的色譜條件，相同濃度的亮藍(lán)3個色譜峰基線分離和未分離時峰面積存在一定的差異，但是相同的色譜條件下，在2-100ppm的濃度范圍，各個亮藍(lán)的同分異構(gòu)體峰面積-濃度的線性關(guān)系較好，可能在不同的色譜條件下，亮藍(lán)的響應(yīng)情況會有稍微的差異，而在特定的色譜條件下，亮藍(lán)各個組分的同分異構(gòu)體并不會發(fā)生很大的轉(zhuǎn)變。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

（1）亮藍(lán)分析時出現(xiàn)的疑似雜質(zhì)峰其實(shí)是亮藍(lán)的同分異構(gòu)體，亮藍(lán)有3種同分異構(gòu)體。

（2）實(shí)際應(yīng)用中可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模瑳Q定是否要使3個同分異構(gòu)體*分離，如果測試的是總的亮藍(lán)含量，把3個目標(biāo)峰合并在一起計算，如果是計算各個異構(gòu)體的含量就要通過調(diào)節(jié)色譜條件使其*分離后再定量計算。